نوع مقاله : مقاله پژوهشی
نویسندگان
1 گروه بیوشیمی بالینی، دانشکده علوم پزشکی، دانشگاه تربیت مدرس، تهران، ایران
2 مرکز تحقیقات پروتئین، دانشگاه شهید بهشتی، تهران، ایران
چکیده
پیشینه مطالعه و هدف: استفاده از کشت سه‌بعدی به منظور افزایش دانسیته سلولی و نیز ایجاد بستری مناسب جهت رشد و تکثیر و تمایز سلول‌های بنیادی یکی از روش‌های مهم جهت کاربرد آنها در مهندسی بافت است. در این تحقیق از سلول‌های بنیادی مزانشیمی بافت چربی به دلیل سهولت دستیابی و مقدار فراوان آن، جهت تمایز به سلول‌های شبه کبدی با هدف بررسی تاثیر کشت سه‌بعدی بر روی داربست سه‌بعدی ژلاتین/لامینین استفاده شده است.
روش مطالعه: استخراج سلول‌های مزانشیمی از چربی زیر پوستی ناحیه شکمی موش C57، به روش هضم آنزیمی انجام شد. بنیادی بودن سلول‌های استخراج شده از طریق آنالیز فلوسایتومتری و مشاهده بیان مارکرهای اختصاصی سلول‌های بنیادی و عدم بیان مارکرهای اختصاصی هماتوپویتیک (CD45) و لکوسیت (CD34) بررسی شد. عدم سمیت داربست با روش MTT بررسی شد. سلول‌های بنیادی، بر روی سطح پلی‌استیرن و سطح پوشیده شده از لامینین و داربست ژلاتین/لامینین کشت داده شد و به مدت 21 روز طی دو مرحله توسط فاکتورهای رشد تیمار شد. تمایز سلول‌ها با روش‌های بیوشیمیایی اوره، ذخیره گلیکوژن بررسی شد.
نتایج: بیان مارکرهای اختصاصی سلول‌های بنیادی و عدم بیان مارکرهای CD45 و CD34 تائید شد. توان تمایزپذیری این سلول‌ها به سلول‌های چربی و استخوان به اثبات رسید.
نتیجه‌گیری: پوشش دادن داربست سه‌بعدی ژلاتین با لامینین باعث افزایش اثر چسبندگی سلول‌های بنیادی مزانشیمی بافت چربی موش شده و نیز حضور این داربست، تمایز این سلول‌ها را به سلول‌های شبه هپاتوسیت در حضور فاکتورهای رشد افزایش می‌دهد.
کلیدواژه‌ها
موضوعات
عنوان مقاله [English]
Study of mouse adipose tissue-derived mesenchymal stem cells differentiation to hepatocyte-like using gelatin/laminin 3D scaffold
نویسندگان [English]
- Elaheh Roshanzadeh 1
- Abbas Sahebghadam Lotfi 1
- Sareh Arjmand 2
1 Department of Clinical Biochemistry, Faculty of Medical Science, Tarbiat Modares University, Tehran, Iran
2 Protein Research Center, Shahid Beheshti University, Tehran, Iran
چکیده [English]
Introduction and Aim: Using 3D culture to increase cell density and creating a suitable bedrock for the growth and proliferation and differentiation of stem cells is one of the important methods for their application in tissue engineering. In this study, mesenchymal stem cells of adipose tissue because of ease of access and abundance have been used to differentiate into hepatocyte-like cells to investigate the effect of 3D cultures on gelatin/laminin 3D scaffolds.
Methods: Mesenchymal stem cells were extracted from subcutaneous fat of the abdominal region of C57 mice by enzymatic digestion using collagenase enzyme. The extracted stem cells were confirmed by flow cytometry analysis and observation of the expression of specific stem cells markers such as CD105, CD44, and the absence of specific leukocyte (CD34) and hematopoietic (CD45). The non-toxicity of the scaffold was also investigated by the MTT method. Stem cells were cultured on a polystyrene surface and laminin and gelatin/laminin scaffold and treated with growth factors for 21 days in two stages. Cell differentiation was investigated by biochemical methods including examination of secretion indices such as urea and glycogen storage.
Results: The expression of specific stem cells markers such as CD105, CD44, and the absence of CD34 and CD45 were proved. The ability to differentiate these cells into adipocytes and osteocytes has been proven.
Conclusion: The results show the presence of a three-dimensional gelatin/laminin scaffold increases the adhesion, proliferation, and differentiation of fatty mesenchymal cells to hepatocyte-like cells.
کلیدواژه‌ها [English]
- hepatocyte-like Cells
- Mesenchymal Stem Cell
- Stem Cell Differentiation
- Gelatin/Laminin Scaffold
)